间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,简称MSC)是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的多能成体干细胞。它们源自中胚层,可以分化成多种细胞类型,包括软骨细胞、脂肪细胞、成骨细胞等。
如何识别间充质干细胞?
间充质干细胞是具有自我更新能力和来源于中胚层的多能成体干细胞。对于体外培养的间充质干细胞的识别,通常可以通过以下三条标准进行验证:
一、细胞形态学观察
间充质干细胞多数呈纤维细胞样生长,少量呈梭形或不规则三角形。可运用组织块贴壁法、酶消化法以及两种方法的结合分离出MSC,通过传代培养后,几乎所有的MSC都具备贴壁生长的能力,并且具有较强的贴壁能力。
二、表面标志物鉴定
间充质干细胞属混杂细胞群,其表面抗原也具有非专一性,可同时表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志,如粘附因子、生长因子和细胞因子受体以及整合素家族等。MSC的细胞表面标志物鉴定标准为:
- 阳性表达:CD105、CD73和CD90的阳性率应大于等于90%。
- 阴性表达:CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR应呈阴性,阳性率小于等于5%。
需要注意的是,阳性标记不具特异性,并非每个MSC都同时表达CD105、CD73和CD90。在鉴定过程中,可采用流式细胞仪对MSC的细胞表型进行准确鉴定。
三、多向分化潜能鉴定
间充质干细胞具有分化为多种细胞类型的能力,如软骨细胞、脂肪细胞、成骨细胞等。通过特异性染色可以鉴定体外成脂、成骨和成软骨诱导后的分化能力:
- 成脂诱导分化鉴定:细胞成脂分化诱导2周左右,在倒置显微镜下观察可见细胞质内出现油滴,经油红O染色后为红色。
- 成骨诱导分化鉴定:细胞成骨分化诱导3周左右时,在倒置显微镜下观察可见不透明区域,经茜素红染色后可见密集的红色沉淀物呈结节状。
- 成软骨诱导分化鉴定:细胞成软骨分化诱导2周左右,在倒置显微镜下观察可见细胞经阿利新蓝染色为淡蓝色。
综上所述,通过细胞形态学观察、表面标志物鉴定以及多向分化潜能鉴定这三条标准,可以较为准确地识别间充质干细胞。同时,这些鉴定方法也为间充质干细胞的研究和应用提供了重要的参考依据。
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